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高效液相色譜儀(HPLC/UPLC)的基本組成與各部分功能(按液路流向列出,含常見(jiàn)可選模塊): 溶劑槽(溶劑瓶) 存放流動(dòng)相溶劑(多種溶劑用于等度或梯度)。需無(wú)顆粒、脫氣且標(biāo)識(shí)清楚。 脫氣裝置(在線(xiàn)脫氣器 / 超聲/真空脫氣) 去除溶劑中溶解氣體,防止色譜基線(xiàn)噪聲和氣泡導(dǎo)致泵擊穿或檢測(cè)器噪點(diǎn)。 泵(恒流/高壓泵,單向、二元/三元/四元混合或梯度泵) 提供穩(wěn)定可控的流速與工作壓力(普通HPLC到數(shù)百bar,UHPLC更高)。負(fù)責(zé)溶劑混配與梯度程序。 進(jìn)樣裝置(手動(dòng)進(jìn)樣器或自動(dòng)進(jìn)樣器/樣品臺(tái)) 將樣品定量引入流路。自動(dòng)樣品器支持不同進(jìn)樣體積、稀釋、洗針、冷藏等功能。 前處理/除顆粒元件(進(jìn)樣閥、濾器、前置柱/保護(hù)柱、在線(xiàn)SPE等) 保護(hù)主柱、去除微粒或濃縮/凈化樣品,延長(zhǎng)色譜柱壽命并減少污染。 色譜柱(分離柱,含填料與維持柱溫的柱箱) 核心分離單元(反相C18、C8、HILIC、離子交換、尺寸排阻等),柱溫箱用于溫度控制以提高重現(xiàn)性。 檢測(cè)器(可選多種) 紫外/可見(jiàn)檢測(cè)器(UV/DAD/PDA):最常用,選擇性好。 熒光檢測(cè)器(FLD):高靈敏、選擇性強(qiáng)。 折光檢測(cè)器(RI):用于不吸UV的組分(受梯度限制)。 蒸發(fā)光散射檢測(cè)(ELSD)、電荷盒檢測(cè)(CAD):檢測(cè)非揮發(fā)性無(wú)色物質(zhì)。 質(zhì)譜(LC–MS/MS/高分辨MS):靈敏且用于結(jié)構(gòu)鑒定和痕量定量。 其他:電化學(xué)檢測(cè)器等。 壓力/流量/溫度監(jiān)測(cè)與保護(hù)元件(壓力傳感器、流量計(jì)、單向閥、泄壓裝置) 實(shí)時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)狀態(tài),保護(hù)設(shè)備與柱子。 廢液/收集器(Fraction collector,可選) 收集目標(biāo)組分或廢液,制備色譜常用。 數(shù)據(jù)采集與控制系統(tǒng)(工作站軟件) 控制泵、進(jìn)樣器、梯度、柱溫與檢測(cè)器;采集與處理色譜譜圖,定量、報(bào)告與系統(tǒng)日志。 附件與外圍設(shè)備 樣品冷卻臺(tái)、自動(dòng)清洗系統(tǒng)、超聲/超濾裝置、溶劑過(guò)濾器、密封件與接頭、備用柱、標(biāo)準(zhǔn)品與維護(hù)工具。 補(bǔ)充:UHPLC/UPLC 與普通HPLC 的不同點(diǎn) 更高耐壓的泵與密封件、更小內(nèi)徑/更短柱、高壓耐受填料、低額外柱容(extra?column volume)以支持更快更高分辨率的分離。 典型液路示意(簡(jiǎn)化) 溶劑槽 → 脫氣器 → 泵(混合/梯度) → 進(jìn)樣器(/前處理) → 色譜柱(柱溫箱) → 檢測(cè)器 → 數(shù)據(jù)系統(tǒng) → 廢液/分餾 |
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